1、原理及适用范围

    菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1 mL（g）检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是常用的微生物检测项目。菌落总数检测板是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在检测板上呈红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定。执行标准：《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》（GB 4789.2）。

2、操作方法

2.1  样品处理：取样品 25 mL（g）放入含有225 mL灭菌磷酸缓冲稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质袋内，制成1:10的样品匀液，必要时用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，注入含有9 mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。

2.2  接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数检测板置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1 mL样品匀液滴加到检测板内，迅速贴好上层膜并水平晃动检测板，让样品匀液均匀吸附在滤纸上，静置10s左右，待样品匀液完全被吸附在滤纸上。每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。

2.3  培养：将检测板叠在一起，倒置于恒温培养箱内。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24 h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48 h。

3、结果判读

     细菌在检测板上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30～300 CFU）的检测板进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（或每克）样品中所含的细菌菌落总数。

4、计数原则及报告方式

4.1  若只有一个稀释度检测板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个检测板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）样品中菌落总数结果。

4.2  若有两个连续稀释度的检测板菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算: 

                                ················ （1）

    式中：

    N——样品中菌落数；

    ∑C——检测板上(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和；

    n1——第一稀释度（低稀释倍数）检测板数；

    n2——第二稀释度（高稀释倍数）检测板数；

d——稀释因子(第一稀释度)。

示例：

上述数据经“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。

4.3  若所有的稀释度菌落总数均大于300 CFU，则对稀释度zui高的检测板进行计数，其他检测板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以zui高稀释倍数计算。

4.4  若所有的稀释度菌落总数均小于30 CFU，则应按稀释度zui低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

4.5 若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以zui低稀释倍数计算。

4.6  若所有稀释度的平均菌落数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU，则以zui接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

4.7 菌落总数的报告

4.7.1 菌落总数在100 CFU以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。

4.7.2 大于或等于100 CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面的0代替位数，也可用指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

4.7.3 若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不可计。

4.7.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

4.7.5 固体样品以CFU/g为单位报告，液体样品以CFU/mL为单位报告。

5、附加说明

5.1  菌落总数检测板检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达90％以上。

5.2  磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0 g分析纯磷酸二氢钾（KH2PO4）溶于500 mL蒸馏水或纯净水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液调节PH至7.2，用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1000 mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.3 生理盐水的配制与灭菌：取8.5 g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到1000 mL蒸馏水或纯净水中，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.4 注意使用过的检测板上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。zuizuizuizuizuizuizui

1、原理及适用范围

    菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1 mL（g）检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是常用的微生物检测项目。菌落总数检测板是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在检测板上呈红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定。执行标准：《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》（GB 4789.2）。

2、操作方法

2.1  样品处理：取样品 25 mL（g）放入含有225 mL灭菌磷酸缓冲稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质袋内，制成1:10的样品匀液，必要时用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，注入含有9 mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。

2.2  接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数检测板置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1 mL样品匀液滴加到检测板内，迅速贴好上层膜并水平晃动检测板，让样品匀液均匀吸附在滤纸上，静置10s左右，待样品匀液完全被吸附在滤纸上。每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。

2.3  培养：将检测板叠在一起，倒置于恒温培养箱内。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24 h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48 h。

3、结果判读

     细菌在检测板上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30～300 CFU）的检测板进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（或每克）样品中所含的细菌菌落总数。

4、计数原则及报告方式

4.1  若只有一个稀释度检测板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个检测板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）样品中菌落总数结果。

4.2  若有两个连续稀释度的检测板菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算: 

                                ················ （1）

    式中：

    N——样品中菌落数；

    ∑C——检测板上(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和；

    n1——第一稀释度（低稀释倍数）检测板数；

    n2——第二稀释度（高稀释倍数）检测板数；

d——稀释因子(第一稀释度)。

示例：

上述数据经“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。

4.3  若所有的稀释度菌落总数均大于300 CFU，则对稀释度zui高的检测板进行计数，其他检测板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以zui高稀释倍数计算。

4.4  若所有的稀释度菌落总数均小于30 CFU，则应按稀释度zui低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

4.5 若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以zui低稀释倍数计算。

4.6  若所有稀释度的平均菌落数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU，则以zui接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

4.7 菌落总数的报告

4.7.1 菌落总数在100 CFU以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。

4.7.2 大于或等于100 CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面的0代替位数，也可用指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

4.7.3 若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不可计。

4.7.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

4.7.5 固体样品以CFU/g为单位报告，液体样品以CFU/mL为单位报告。

5、附加说明

5.1  菌落总数检测板检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达90％以上。

5.2  磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0 g分析纯磷酸二氢钾（KH2PO4）溶于500 mL蒸馏水或纯净水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液调节PH至7.2，用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1000 mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.3 生理盐水的配制与灭菌：取8.5 g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到1000 mL蒸馏水或纯净水中，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

5.4 注意使用过的检测板上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。zuizuizuizuizuizuizui

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